Анализ ПЦР: что это такое? Как правильно сдавать анализ ПЦР

Диагностика вирусных и бактериальных инфекций методом ПЦР

Анализ ПЦР: что это такое и как он работает? Сущность метода заключается в том, чтобы с помощью специального фермента ДНК-полимеразы в искусственных условиях увеличить в объеме определенную микробную среду. Для этого многократно преумножают имеющийся ДНК-материал. Таким образом, при наличии патогенного микроорганизма в образце его количество будет увеличено за счет биохимических лабораторных манипуляций, и бактерию не составит труда обнаружить в микроскоп.

Метод полимезарной цепной реакции используют в различных областях медицины:

  • криминалисты с его помощью идентифицируют генетический материал, например волосы, слюну или кровь;
  • анализ крови ПЦР помогает при генотипировании, например для обнаружения индивидуальной генетически заложенной реакции на определенный лекарственный препарат;
  • с помощью такого метода устанавливают наличие родственных связей между людьми;
  • самым востребованным ПЦР-метод стал в медицинской диагностике для определения различных инфекционных заболеваний.

Итак, медицина давно и успешно использует анализ ПЦР. Что это такое, мы уже узнали. А каких возбудителей можно обнаружить с его помощью? Методом ПЦР диагностируются следующие инфекционные заболевания:

  • гепатиты А, В, С;
  • уреаплазмоз;
  • кандидоз;
  • хламидиоз;
  • микоплазмоз;
  • гарднереллез;
  • инфекционный мононуклеоз;
  • трихомониаз;
  • папилломавирусная инфекция;
  • туберкулез;
  • герпесная инфекция 1-го и 2-го типов;
  • хеликобактериоз;
  • цитомегаловирус;
  • дифтерия;
  • сальмонеллез;
  • ВИЧ-инфекция.
    Анализ ПЦР на ВИЧ

Также методы ПЦР используются в диагностике онкозаболеваний.

В связи с тем, что метод полимеразной цепной реакции очень чувствителен к изменениям в организме и условиям проведения диагностики, многие факторы могут повлиять на результат. Поэтому анализ ПЦР на ВИЧ-инфекцию не является достоверным методом, его эффективность — 96–98 %. В остальных 2-4 % случаев тест дает ложноположительные результаты.

Но в некоторых ситуациях без ПЦР-диагностики ВИЧ не обойтись. Обычно ее проводят людям с ложноотрицательным результатом ИФА. Такие показатели говорят о том, что у человека еще не выработались антитела к вирусу и их невозможно выявить без многократного увеличения количества. Именно этого можно достичь, проведя анализ крови ПЦР-методом.

Также необходима такая диагностика детям первого года жизни, рожденным от ВИЧ-позитивной матери. Метод является единственным способом достоверного определения статуса ребенка.

Метод полимеразной цепной реакции позволяет обнаружить ДНК вируса гепатитов А, В, С задолго до образования антител к инфекции или появления симптомов болезни. Особенно эффективным является анализ ПЦР на гепатит С, так как в 85 % случаев такое заболевание протекает бессимптомно и без своевременного лечения переходит в хроническую стадию.

Своевременное обнаружение возбудителя поможет избежать осложнений и длительного лечения.

Иллюстрация 1

Метод является экспериментальным исследованием в молекулярной биологии. Благодаря ПЦР стало возможным многократно увеличить незначительные концентрации отдельных фрагментов ДНК, полученные в процессе забора биологического материала.

При помощи ферментов тот или иной участок нуклеиновой кислоты можно удвоить. Весь процесс происходит в искусственных условиях. То есть, метод позволяет создать “клоны” определенного участка кислоты.

Помимо этого, используя ПЦР, можно производить мутации генетического материала, сращивать несколько фрагментов ДНК вместе. При помощи этого метода можно установить факт отцовства (именно этот метод используется при проведении генетической экспертизы). Также метод позволяет клонировать уже имеющиеся гены и выделять новые.

Продолжительность подготовки результатов рассматриваемого вида тестирования будет определяться возможностями лаборатории, в которой его будут проводить.

Чаще всего на расшифровку уходит1-2 дня. Однако, в экстренных ситуациях ПЦР может быть выполнен в течение нескольких часов.

Главными преимуществами рассматриваемого тестирования являются его надежность и достоверность.

Расшифровка ПЦР-диагностики дает возможность:

  • Наиболее точно определить наличие/отсутствие инфекции в организме.
  • Диагностировать разновидность вирусного агента.
  • Отыскать бактерии даже при минимальном количестве вражеских ДНК во взятом биоматериале.

Перечень предлагаемых исследований на HCV включает несколько пунктов, отличающихся по стоимости, срокам готовности и способу выполнения. 

Если обратиться к протоколам Всемирной организации здравоохранения (ВОЗ), порядок диагностики инфекции включает несколько последовательных этапов.

Для начала сдают:

  • общий анализ крови и мочи;
  • биохимия крови;
  • исследование на содержание глюкозы (строго натощак);
  • анализ на ВИЧ;
  • флюорография;
  • иммунограмма (при подозрении на наличие аутоиммунных патологий). 

При отклонении показателей биохимического анализа крови от физиологической нормы пациенту назначают тест, основанный на обнаружении специфических антител, вырабатываемых при контакте вируса с кровью (ИФА).

Но подобный анализ крови на гепатит С имеет существенный недостаток. Процесс синтеза антител зависит от функционирования и выработки иммунокомпетентных клеток. Индивидуальные особенности организма могут стать причиной как ложноотрицательного, так и ложноположительного ответа. 

Перед назначением теста ИФА врач рассказывает пациенту о возможной ошибке, что вызывает ответный вопрос: «Какой анализ крови показывает гепатит С с минимальным риском получения неверных результатов?» Для подтверждения или опровержения диагноза самым точным лабораторным тестом является проведение ПЦР методом real time.

Дальнейшая тактика действий зависит от того, что покажет исследование. В случае подтверждения диагноза, пациенту сразу же назначают гепатопротекторы, предупреждают о важности правильного питания и здорового образа жизни. Но таргетная терапия невозможна без определения уровня вирусной нагрузки и генотипа гепатита С.

Некоторые лекарственные препараты могут спровоцировать обострение гепатита В. Поэтому для исключения осложнений, дополнительно назначают анализы на HBsAg. HCV лечат только после получения отрицательного результата исследования. 

Диагностика методом ПЦР получила широкое распространение благодаря:

  • высокой точности (при условии использования тест-систем последнего поколения);
  • простоте забора биоматериала;
  • быстроте получения результатов (максимум 5 дней).

Но основное преимущество состоит в широких диагностических возможностях исследования. Анализ позволяет не только выявить вирус, но и точно определить его концентрацию в организме и установить генотип инфекции. Кроме того, количественное исследование необходимо для оценки эффективности противовирусной терапии.

Вычленение ДНК является самым первым этапом проведения ПЦР-диагностики. Заключается он в следующем: забранные у больного образцы обрабатываются специальным образом, в результате чего сдвоенная спираль ДНК расщепляется на несколько нитей. Стоит отметить, что с целью обеспечения чистоты реакции в образцы добавляется определенная компонента, позволяющая растворить всю органику. Именно этим способом удаляются аминокислоты, углеводы, липиды, пептиды, полисахариды и белки. Вследствие всех этих манипуляций создается ДНК.

Необходимость подобных мероприятий обуславливается, прежде всего, тем, что в основе ПЦР-диагностики инфекций лежит создание новых ДНК или РНК инфекций. И, конечно, осуществить это, не удалив клеточный материал, нельзя.

На сегодняшний день к числу ПЦР инфекций можно отнести:

  • пневмонию и дифтерию бактериальной и вирусной формы, туберкулез;
  • болезни ЖКТ, обусловленные присутствием в организме бактерии Helicobacter Pilori;
  • болезни, обусловленные наличием в организме сальмонеллы, холерного вибриона, боррелий;
  • инфекции, носящие вирусный характер, например, ВИЧ, вирусы папилломы человека, герпеса, гепатита, онковирусы и ретровирусы;
  • инфекционный мононуклеоз;
  • заболевания, обусловленные генетическими особенностями человека;
  • ЗППП, например, гарднереллез, уреаплазмоз, микоплазмоз, хламидиоз, трихомониаз;
  • клещевой энцефалит;
  • цитомегаловирусную инфекцию;
  • кандидоз;
  • листероз и многие другие заболевания, на протяжении многих лет способные присутствовать в человеческом организме в скрытом виде.

ПЦР-исследование имеет стоимость, которая зависит от того, какая именно инфекция будет проверена, от методики анализа и исследуемого материала. Чтобы определить одну инфекцию, придется отдать в пределах 200-800 рублей. Также добавляется плата за взятие биоматериала – примерно 400 рублей.

ДНК — диагностика — это один из наиболее современных, высокотехнологичных методов исследования в лабораторной диагностике.

  • Полимеразная цепная реакция, или ПЦР анализ, позволяет выявить в организме человека многие инфекционные заболевания, которые были вызваны вирусами  или возбудителями бактериальной природы.
  • С помощью данного анализа можно обнаружить болезни не только в острой стадии, но и во время инкубационного (скрытого) периода.

Данный метод исследования обладает многими преимуществами:

  • Возможность обнаружить конкретного возбудителя и целого ряда микроорганизмов;
  • Высокая точность: вероятность ложных результатов ничтожно мала;
  • Диагностика скрытых, вяло текущих заболеваний, не беспокоящих какими-либо проявлениями;
  • Быстрое получение результатов;
  • Использование биологического материала различного рода: крови, плазмы, сыворотки крови, мочи, кала, биологических  жидкостей, мокроты, слизи, выделений;
  • ПЦР анализ может быть качественный и количественный, то есть, не только выявлять вид возбудителя болезни, но и давать информацию о его количественном содержании в организме.

ПЦР диагностика позволяет выявить в организме наличие следующих инфекций:

  • Туберкулез;
  • вирус Эпштейна-Барра;
  • Токсоплазмоз;
  • Листериоз;
  • Опоясывающий лишай;
  • Цитомегаловирус;
  • Хламидиоз;
  • Клещевой энцефалит и многие другие;
  • При помощи ПЦР возможна диагностика вирусных гепатитов.
  • ВИЧ, вирус иммунодефицита человека, также может быть диагностирован посредством ПЦР теста.
  •  Данный метод обследования используется, например, для обнаружения ВИЧ у ребенка зараженной матери.

Туберкулез также можно выявить по результатам анализа крови методом ПЦР.

  • Лечащие врачи дают пациентам направление на данное обследование для уточнения диагноза в спорных случаях.

История открытия

Изобрел способ полимеразной цепной реакции (ПЦР) американский ученый Кэри Мюллис в 1983 г. Изначально запатентован метод диагностики компанией «Цетус Корпорейшн», в которой и работал его создатель. Но в 1992 г. все права и патенты были проданы компании «Хоффман-Ля Рош». После чего оказалось, что параллельно похожие исследования проводились и были зафиксированы другими американскими биологами, такими как Элис Чен, Дэвид Эдгар, Джон Трел. В 1980 г.

занимались данной проблемой и советские ученые А. Слюсаренко, А. Каледин и С. Городецкий. Поэтому определить единственного правообладателя оказалось невозможным. Многие выдающиеся биохимики внесли определенный вклад в разработку методики полимеразной церной реакции и запатентовали свои нововведения. На данный момент анализ методом ПЦР проводят повсеместно в специально оборудованных лабораториях.

Как правильно сдавать кровь

Одним из самых распространенных видов исследования является анализ крови методом полимеразной цепной реакции, ПЦР;

  • Анализ методом ПЦР основан на обнаружении в материале исследования небольшого фрагмента ДНК возбудителя той инфекции, которую подозревает врач.
  • В устоявшейся клинической практике ПЦР  анализы обычно сдают блоками, на определенные группы конкретных возбудителей. Например:

ПЦР — диагностика  вирусных инфекций,   ( вирусных гепатитов, герпеса и других ).

ПЦР — диагностика острых кишечных и респираторных инфекций.

Перед тем, как сдавать кровь на обнаружения возможного вируса, следует соблюсти ряд правил подготовки к анализу.

Основные аспекты указаны в памятке:

  1. За 5–7 дней отказаться от потребления жирной, жареной пищи, алкоголя. В целом, доктора рекомендуют придерживаться правил питания по диете №5.
  2. За 12–14 часов до проведения исследования не есть. Пить можно только воду.
  3. Сдать кровь лучше в первой половине дня.
  4. До процедуры не курить.

Также следует предупредить доктора о принимаемых лекарственных препаратах, возможных проблемах со здоровьем, хронических заболеваниях. 

Забор крови выполняется из вены. После окончания процедуры место прокола медсестра заклеивает стерильным пластырем, предупреждает о необходимости согнуть руку и держать ее в таком положении 10–15 минут. В противном случае высока вероятность появления болезненной гематомы. 

Количественная ПЦР – это такая разновидность ПЦР, которая проводится в режиме реального времени.

Под этим понимается вариант ПЦР, при котором постоянно регистрируется кинетика реакции, позволяющая качественно оценивать в сложной молекулярной смеси содержание конкретных нуклеотидных последовательностей ДНК.

Количественный метод ПЦР рассмотрим подробнее ниже.

Другие анализы методом ПЦР

Для данного анализа можно исследовать ряд других жидкостей организма: например, сок простаты, плевральную жидкость, спинномозговую, околоплодную, суставную, слюну и др..

  • Исследование практически не имеет отличий от анализа крови.
  • Происходит клонирование фрагментов нуклеиновых кислот различных возбудителей, методом полимеразной цепной реакции, ПЦР.
  •  На основе полученного результата специалисты делают вывод о наличии у человека какого-либо заболевания.

Как проводится исследование материала?

Анализ ПЦР: что это такое? Как правильно сдавать анализ ПЦР

Для проведения анализа требуется:

  • ДНК-матрица;
  • праймеры, соединяющие концы фрагмента материала;
  • термоустойчивый фермент ДНК-полимеразы;
  • химические вещества, обеспечивающие правильную работу ферментов;
  • буферный раствор, необходимый для создания соответствующих условий для роста и развития ДНК-материала.
    Анализ ПЦР 12

Для выполнения ПЦР выполняют 25-30 повторов, состоящих из трех стадий: денатурации, отжига и элонгации.

Для анализа полимезарной цепной реакции используют специальный прибор – амплификатор. Современное оборудование позволяет устанавливать необходимую программу нагревания и охлаждения пробирок для устранения ошибок во время проведения диагностики.

В современной нам медицине исследование методом ПЦР производится в 4 этапа, включающих в себя:

  • получение биологического материала, требуемого для исследования;
  • вычленение ДНК;
  • амплификацию ДНК-фрагментов;
  • детекцию ДНК-продуктов амплификации.

Рассмотрим каждый из них более подробно.

Исследовать в данном случае можно практически все биологические жидкости: мочу, кровь, слюну, спинномозговую жидкость, отделяемое слизистых оболочек и раневых поверхностей, содержимое полостей тела. Забираются образцы для исследования ПЦР одноразовыми инструментами, после чего помещаются в стерильные пробирки из пластика или же на культуральные среды с последующим перемещением в лабораторию, занимающуюся этим видом исследований.

Амфипликатор для ПРЦ-диагностики

Сдача количественной ПЦР проводится в клинике, преимущественно с утра. Пациенту во время визита к врачу скажут, что необходимо сдавать: соскоб, мазов, мочу или кровь. ПЦР может определить возбудителей вне зависимости от уровня загрязнения материала.

Для положительного анализа в теории требуется присутствие всего лишь одного возбудителя в образцах. На практике же стараются создать еще более благоприятные условия. Существуют для этого некоторые рекомендации:

  • если сдают соскоб или мазок из половых органов, нужно воздержаться от интимной связи за три дня до исследования;
  • нельзя перед анализом спринцеваться с антибактериальными препаратами или подмываться;
  • за три часа до взятия из уретры мазка нужно потерпеть и не опорожнять кишечник.

При сдаче крови пациентом таких правил можно не придерживаться.

Как расшифровываются результаты количественного анализа ПЦР?

Сколько делается анализ, зависит от лаборатории. Средний срок выполнения колеблется в пределах 1–3 дней. Некоторые клиники предоставляют платную услугу быстрой постановки ПЦР, однако время проведения ограничивается возможностями медицинской аппаратуры. 

В поликлинике результаты могут передаваться врачу в течение 7–10 дней. Это связывают с большим наплывом пациентов. При этом биологический материал хранится в соответствии со всеми требованиями. 

  1. Инструментарий, контейнеры для изъятого материала должны быть продезинфицированы. А лучше использовать одноразовые приспособления.
  2. Собранные образцы крови нужно помещать в пробирки, которые содержат антикоагулянты. А в процессе забора обращаются к специальным вакуумным системам.
  3. Забор любого биоматериала нужно осуществлять в манипуляционном кабинете.
  • Мaзки/сoскобы из шейки матки/уретры, утренняя мoча: при тестировании на патологии, которые передаются половым путем.
  • Крoвь: при тестировaнии на TORCH-инфекции, ВИЧ, гепатит.
  • Спиннoмозговая жидкoсть: при подозрении на дефекты в работе центральной нервной системе.
  • Мазoк из горла/зева: при проверке на цитомегаловирус, мононуклеоз.
  • Мoкрота/плевральная жидкость: при инфицировании легких.
  • Образцы ткани плаценты: для исключения либо подтверждения внутриутробной инфекции.

Принцип действия и ход реакции

К основным недостаткам метода полимеразной цепной реакции относятся:

  1. Необходимость грамотного подхода к подбору последовательности праймеров. Конечно же, в лабораториях используются программы, существенно упрощающие поиск требуемых регионов ДНК, однако ни одна из имеющихся методик не гарантирует хорошую работу праймеров, ведь фактически они являются набором молекул разнообразного состава и длины.

    Это является причиной возникновения «минусовых» фракций, представляющих собой молекулы, последовательность которых укорочена на одно или несколько оснований, причем местоположение пропущенного нуклеотида в данной ситуации может быть любым. Именно поэтому получить качественный результат можно только после того, как эти фракции будут очищены.

  2. Сложности со смешиванием 4-х видов нуклеотидов. Различная пропорция нуклеотидов может повлечь за собой значительное увеличение ошибок ДНК-полимеразы в ходе амплификации. Именно поэтому в ходе ПЦР-анализа на инфекции требуется следить за концентрацией ионов магния ввиду того, что уменьшение катионов оказывает влияние на специфичность и температуру гибридизации праймеров.
  3. Необходимость соблюдения определенных технологий, а также тщательного соблюдения всех этапов исследования в изолированных друг от друга лабораторных зонах, обусловленная риском амплификации незначительных объемов неспецифических ДНК, способных привести к постановке неверного диагноза. Кроме того, ПЦР-анализ на инфекции больше используется для получения ответов на поставленные вопросы по принципу «да-нет», а именно о том, присутствует ли в образце возбудитель того или иного заболевания.

    А вот для определения того, какой микроорганизм из огромного количества существующих имеется в образце, этот анализ подходит замечательно. Обуславливается это тем, что метод ПЦР наиболее эффективен тогда, когда тестовая реакция содержит одну или несколько пар праймеров. Если же в одной реакции задействовано большее количество пар праймеров, соответствующих разнообразным инфекциям, появляется проблема, связанная с возникновением артефактов.

  4. Возможность неправильной интерпретации результатов анализов, связанная с тем, что определение ДНК возбудителя далеко не во всех случаях свидетельствует о том, насколько он жизнеспособен, а также о непосредственной связи обнаруженного инфекционного агента с тем или иным патологическим процессом.
  5. Возможность получения неверного результата в случае неправильного забора биоматериала. Строго говоря, для того, чтобы произвести качественный ПЦР-анализ, необходимо правильно забрать образцы биоматериала у пациента и правильно их подготовить.
  6. Необходимость максимально полного удаления антикоагулянтов и остатков гемма во время извлечения нуклеиновых кислот с целью обеспечения максимальной эффективности амплификации.
  7. Склонность ДНК-полимераз, используемых в ПЦР, к ошибкам.

Услышав жалобы на понос, рвоту, боли в животе, лечащий врач может направить клиента на сдачу ПЦР анализа кала.

  • На данный метод исследования затрачивается сравнительно небольшой промежуток времени.
  • Результаты пациент узнает уже через несколько часов.
  • Основными рекомендациями для получения достоверного результата является стерильность контейнера, в который будет помещен биологический материал,
  • а также исключение использования медикаментов, способных повлиять на работу кишечника или изменить окрашивание кала.

В основе метода ПЦР лежит принцип образования комплементарных комплексов, возникающих между матрицей и праймером. Комплексы представляют собой короткие синтетические нуклеотиды. Длина каждого составляет около 20-130 букв.

Для проведения одной реакции требуется необходимый участок ДНК, раствор, обеспечивающий условия реакции, праймер, ДНК-полимераза, устойчивая к воздействию температур и дезоксирибонуклеозидтрифосфаты.

В ходе реакции происходит около пятидесяти циклов. Каждый цикл состоит из трех стадий:

  1. Денатурация. Двухцепочечная ДНК-матрица нагревается до 96 градусов в течение двух минут. В результате нагревания цепи молекулы должны разъединиться. Иногда перед этапом денатурации проводится реакция “горячего старта”, при которой вся смесь предварительно нагревается в течение пяти минут, что позволяет снизить количество неспецифичных продуктов в ходе реакции.
  2. В процессе следующего этапа – отжига – температура реакции понижается так, чтобы она была чуть ниже температуры плавления цепочек ДНК. Этап отжига длится около двух минут. За это время праймеры должны плотно связаться с матрицей в определенном месте. Неправильный выбор температурного режима может привести к нарушению данного этапа реакции.
  3. На этапе элонгации ДНК реплицирует матричную цепочку, используя праймер. Состав полимеразы определяет температуру элонгации. Так, наиболее часто элонгируемые полимеразы Taq и Pfu достигают максимальной активности при температуре около 72 градусов. Весь процесс длится около 15-ти минут.

Проведение анализа мочи на ПЦР

Основным показанием к сдаче крови на гепатит С методом полимеразной цепной реакции является положительный результат иммуноферментного анализа (вне зависимости от разновидности: Total, дифференцированный тест на IgG и IgM).

Кроме того, провериться нужно:

  • в период беременности (тест делают дважды – в первом триместре и за 7–10 недель до родов);
  • при работе, связанной с повышенным риском инфицирования (медсестры, лаборанты, работники донорских центров, косметологи и т.д.);
  • при беспорядочных половых связях и незащищенном контакте с малознакомым человеком;
  • на фоне ВИЧ, онкологических заболеваний, приема определенных медикаментозных средств и т.д.;
  • пациентам, зависимым от внутривенных наркотиков;
  • при постоянном проведении инвазивных диагностических или лечебных процедур;
  • при проведенном до 1992 года переливании крови (ранее не существовало достоверных способов проверки донорского биологического материала на наличие вируса).
  • при соприкосновении открытой раны с чужой кровью, нестерилизованным медицинским инструментарием. 

Рост заболеваемости растет с каждым годом. Поэтому для раннего выявления инфекции лабораторные тесты на HCV рекомендуют сдавать один раз в год.

PCR analyze krovi

Способ проведения ПЦР – лабораторное установление инфекции в образцах, изолированных от пациента (ин витро).

Чтобы провести полимеразную цепную реакцию, требуется набор особых реактивов.

Исследуемый материал вносится в пробирки с реактивами. Пробирки ставят в специальный аппарат – амплификатор ПЦР, который предназначен для амплификации (повышения количества) искомых фрагментов РНК или ДНК, ПЦР амплификатор работает в циклическом режиме. При любом цикле, если в образцах имеется последовательность РНК или ДНК возбудителя, то в растворе все больше накапливаются копии частиц данных нуклеиновых кислот. Определить можно и присутствие возбудителя, и количество его в образцах.

Забор биологического материала может быть произведен с различных участков тела:

  • При выявлении инфекций мочеполовой системы берется мазок из урогенитального тракта, шейки матки или производится забор мочи.
  • Биологическим материалом при диагностике ВИЧ инфекций и гепатитов служит кровь.
  • Инфекционный мононуклеоз может быть выявлен при исследовании содержимого мазка из зева.
  • В некоторых случаях может быть произведен соскоб материала с необходимого участка тела или слизистой.

Если пациенту предстоит сдать мазок, и мужчинам, и женщинам необходимо провести специальную подготовку к анализу:

  • Три часа до сдачи анализа пациенту нельзя мочиться.
  • Исследование нельзя проводить в период приема антибиотиков.
  • Девушкам мазок рекомендуется сдавать в середине цикла.
  • Половой контакт желательно исключить за сутки до сдачи биоматериала.
  • Несколько часов до сдачи мазка запрещено подмываться.

Остальные типы исследований специальной подготовки не требуют.

  • Выявление инфекций, передающихся половым путем, чаще всего осуществляется посредством ПЦР исследования мочи.
  • Этот метод позволяет диагностировать, к примеру, вирус иммунодефицита человека, наличие в организме микроорганизмов рода Кандида.
  • Главным условием сдачи ПЦР анализа мочи является воздержание от половых контактов.
  • Женщинам также не следует сдавать мочу во время менструации.

Для максимально точного результата исследования клиент должен подготовиться процедуре отбора биологического материала. Среди рекомендаций по подготовке к сдаче крови выделяют:

  • Исключение тяжелых физических нагрузок;
  • Употребление «правильной» пищи (отсутствие в рационе алкоголя и жирной пищи).

Для продуктивной сдачи мочи необходимо:

  • Использовать стерильный контейнер для переноса жидкости;
  • Отбирать биологический материал утром, сразу после пробуждения;
  • Воздержаться от половых связей за несколько дней до процедуры.

Подготовка к отбору мазка включает в себя:

  • Гигиену половых органов с помощью обычной проточной воды, при отсутствии ароматных моющих средств;
  • Воздержание от мочеиспускания за некоторое время до сдачи биологического материала.

Где сдать анализы на ПЦР

Анализ ПЦР: что это такое? Как правильно сдавать анализ ПЦР

Где сдать ПЦР-анализ: в государственной поликлинике или в частной лаборатории? К сожалению, в муниципальных медицинских учреждениях аппаратура и методы нередко устаревшие. Поэтому лучше отдать предпочтение частным лабораториям с современным оборудованием и высококвалифицированными кадрами. Кроме того, в частной клинике вы получите результаты значительно быстрее.

В Москве многие частные лаборатории предлагают проведение анализа ПЦР на различные инфекции. Например, в таких клиниках, как «Вита», «Комплексная клиника», «Счастливая семья», «Уро-Про», проводят анализ ПЦР. Цена обследования составляет от 200 руб. за определение одного возбудителя.

Можно сделать вывод, что диагностика инфекционных заболеваний методом ПЦР в большинстве случаев является быстрым и достоверным способом обнаружения возбудителя в организме на ранних сроках инфицирования. Но все же в определенных случаях стоит выбрать другие способы диагностики. Определить необходимость проведения такого исследования может только специалист.

Данный вид исследования относится к современным и высокотехнологическим способам диагностики. Сдавать анализы методом ПЦР следует в лабораториях, которые обладают всем необходимым комплексом для получения полноценных результатов. Не меньшую роль играют квалифицированные, подготовленные кадры. Отдайте предпочтение крупными, серьезным, известным лабораториям. Это поможет не только получить результаты быстро, но и обеспечит их достоверность.

При обращении в поликлинику, пациент имеет право на бесплатные анализы. Но сначала сдают тест ИФА. И только при положительном либо сомнительном результате показано исследование методом ПЦР. Поэтому провести срочную диагностику можно обратившись в платную лабораторию, где сдать кровь на ПЦР можно в удобное для пациента время. Одновременно рекомендуют сразу проверить показатели печеночных ферментов, стандартные клинические параметры крови.

Как правило, изучение крови методом ПЦР доступно практически в любой лаборатории. Если пункт забора крови не оснащен должным оборудованием, биологический материал транспортируют для проведения исследования с соблюдением температурного режима и других условий. Проведение ПЦР в поликлинике возможно только после других обследований, результаты которых косвенно укажут на наличие гепатита С.

Преимущества метода

Даже если в пробе биоматериала присутствует всего лишь несколько молекул ДНК, метод позволяет точно определить возбудителя заболевания.ПЦР-анализ может быть проведен в следующих случаях:

  • При выявлении долгорастущих возбудителей в процессе диагностики заболеваний, передающихся половым путем.
  • В диагностике ВИЧ, СПИД, гепатита и других вирусных инфекций. Данная реакция является более чувствительной по сравнению с другими методами микробиологического и иммунохимического исследования.
  • В диагностике бактериальных инфекций, а также хламидий, уреплазмы, микоплазмы и прочих.
  • В диагностике скрытых и некультивируемых форм микроорганизмов.Такие микроорганизмы обнаруживаются у пациентов с латентными или хроническими инфекциями.

Анализ ПЦР на гепатит С

Преимущества метода:

  • ПЦР-диагностика высокоэффективна в отношении внутриклеточных паразитов, обладающих высокой антигенной изменчивостью.
  • Метод способен выявить возбудителей не только в биологическом материале пациента, но и в материале биологической среды (почва, вода и т.д.)
  • Метод обладает высокой чувствительностью к гонорее, герпесу и вирусу папилломы человека.
  • В пульмонологии ПЦР применяется в рамках дифференциальной диагностики вирусной и бактериальной пневмонии и туберкулёза.
  • Гастроэнтерологические исследования также включают ПЦР при диагностике хеликобактериоза.
  • ПЦР является экспресс-методом диагностики таких заболеваний, как: вирусные гепатиты В, С и G, дифтерия и сальмонеллёз.
  • Гематология использует метод ПЦР при выявлении онковирусов.

Диагностика ПЦР обладает рядом преимуществ:

  1. Высокая чувствительность. Даже при наличии всего нескольких молекул ДНК микроорганизма анализ ПЦР определяет наличие инфекции. Поможет метод при хронических и латентно протекающих заболеваниях. Часто в таких случаях микроорганизм является некультивируемым иными способами.
  2. Для исследования подходит любой материал, например слюна, кровь, половые выделения, волосы, клетки эпителия. Наиболее распространенным является анализ крови и урогенитального мазка на ПЦР.
    ПЦР: сдать анализ
  3. Не требуется длительного выращивания культур. Автоматизированный процесс проведения диагностики позволяет получить результаты исследования спустя 4-5 часов.
  4. Метод является практически стопроцентно достоверным. Зафиксированы лишь единичные случаи ложноотрицательного результата.
  5. Возможность определить несколько видов возбудителей из одной пробы материала. Это не только ускоряет процесс диагностики заболевания, но и существенно снижает материальные затраты. Часто врач назначает комплексный анализ ПЦР. Цена обследования, состоящего из определения шести возбудителей, составляет около 1500 рублей.

Подготовка к проведению ПЦР анализа

  1. Если указанный материал извлекают из уретры, запрещены половые акты и использование антибактериальных средств для интимной гигиены за 3 дня до сдачи анализа. За 3 часа до тестирования нужно воздержаться от мочеиспускания.
  2. Кровь для исследований берут ранним утром на голодный желудок.
  3. Для тестирования мочи используют первую ее порцию после сна. Для данного анализа пациенту следует предварительно приобрести специальный контейнер в аптеке. Взятый биоматериал желательно доставить в диагностическую лабораторию через два часа.
  4. Мазок из влагалища лучше брать за пару дней до менструации, либо через 1-2 дня после ее завершения.
  5. Образец слюны нужно изымать только после тщательного полоскания (3 раза) ротовой полости физиологическим раствором.

Если есть возможность, взятый биообразец нужно сразу же отнести в лабораторию.

При невозможности срочной доставки, материал можно хранить короткое время в прохладном месте ( 4… 8 С).

При необходимости длительного хранения некоторые виды биоматериалов можно замораживать, но — только единожды.

К контейнеру следует обязательно приложить направление доктора на ПЦР.

Анализ ПЦР: что это такое? Как правильно сдавать анализ ПЦР

Общий анализ мочи — расшифровка результатов и физические свойства мочи

Чтобы результаты были достоверными при проведении исследования ПЦР, сдать анализ нужно, соблюдая рекомендации по предварительной подготовке к диагностике:

  1. Перед сдачей слюны следует воздержаться от приема пищи и лекарств за 4 часа до забора материала. Непосредственно перед процедурой прополощите рот кипяченой водой.
  2. Вышеуказанными правилами нужно руководствоваться и при взятии образца с внутренней поверхности щеки. После полоскания рекомендуют провести легкий массаж кожи для выделения секрета железы.
  3. Мочу обычно собирают в домашних условиях. Для этого нужно провести тщательный туалет половых органов. В стерильный пластиковый контейнер необходимо собрать 50-60 мл мочи. Для обеспечения чистоты материала рекомендуется женщинам вставить тампон во влагалище, а мужчинам максимально оттянуть кожную складку. Нельзя сдавать материал в период менструальных выделений.
  4. Для сдачи спермы нужно воздержаться от полового акта в течение 3 дней до забора материала. Также врачи советуют отказаться от посещения сауны и принятия горячей ванны, употребления алкоголя и острой пищи. За 3 часа до анализа нужно воздержаться от мочеиспускания.
  5. Для сдачи урогенитального мазка, например если проводится анализ на хламидии ПЦР, как женщинам, так и мужчинам рекомендуется половой покой в течение 3 дней. За 2 недели до анализа нельзя принимать антибактериальные препараты. За неделю нужно прекратить использование интимных гелей, мазей, влагалищных свечей, спринцевание. За 3 часа до исследования нужно воздержаться от мочеиспускания. Во время менструаций забор материала не проводится, лишь спустя 3 дня после прекращения кровяных выделений можно взять урогенитальный мазок.

Точность

Степень достоверности результата зачастую зависит от подготовки пациента.

  • Результат проведенного исследования всегда однозначен: либо отрицателен, либо положителен.
  • Но специалист не может поставить точный диагноз, руководствуясь только результатом теста ПЦР.
  • Он используется в качестве дополнительного обследования.
  • Для анализа крови методом ПЦР используется кровь, взятая из вены.
  • Причем, в случае, когда полимеразная цепная реакция проводится на ранних стадиях заболевания, есть вероятность ложноотрицательного результата.
  • Тогда необходимо повторное проведение процедуры через определенный период.

Пациенты часто сталкиваются с ложноположительным или ложноотрицательным результатом анализа. В первом случае тест показывает наличие вредоносного гена или болезнетворной бактерии, в то время как на самом деле он не присутствует в организме.

Согласно статистике, анализ способен точно определить тип возбудителя и определить инфекцию даже при малом содержании ее ДНК в биоматериале.

Погрешность метода полимеразной цепной реакции по сравнению с другими иммунологическими методами исследований минимальна. Анализ ПЦР никогда не дает ложноположительных результатов и в редких случаях может дать ложноотрицательный результат.

Когда показан анализ ПЦР при беременности

  • ПЦР анализ как метод, используемый для диагностики огромного количества болезней, является обязательным для женщины во время беременности.
  • Обследование проводится для того, чтобы понять, имеет ли место угроза для нормального развития плода.
  • Обследование такого рода может быть назначено как в виде плановой процедуры, так и в случае, когда имеется подозрение на наличие каких-либо заболеваний.
  • Специалист может по результатам полимеразной цепной реакции сделать вывод о развитии определенных патологий в организме беременной женщины, а также о риске заражения плода.

В период ожидания малыша многие инфекционные заболевания, передающиеся половым путем, являются крайне опасными для нормального развития плода. ЗППП могут спровоцировать внутриутробную задержку развития, выкидыш или преждевременные роды, врожденные пороки ребенка. Поэтому крайне важно пройти на ранних сроках беременности обследование методом ПЦР. Сдать анализ необходимо при постановке на учет – до 12 недель.

Забор материала происходит из канала шейки матки с помощью специальной щеточки. Процедура безболезненная и не представляет опасности для малыша. Обычно во время беременности проводят анализ на хламидии ПЦР-методом, а также на уреаплазмоз, микоплазмоз, цитомегаловирус, герпес, папилломавирус. Такой комплекс обследования называют ПЦР-6.

ПЦР анализ на ВИЧ и вирус герпеса

  • Методом ПЦР можно определить наличие ВИЧ-инфекции в организме.
  • Наличие ВИЧ — инфекции  также является одним из условий, при которых необходима сдача ПЦР анализа на вирус герпеса.
  • Обследование поможет обнаружить вирусную нуклеиновую кислоту за небольшой промежуток времени.
  • Для проведения исследования дополнительно может использоваться такой биологический материал, как мазок из уретры.
  • Перед процедурой отбора пациенту следует воздержаться от мочеиспускания в течение нескольких часов.

Комплексное обследование ПЦР

Комплексный анализ ПЦР: что это такое? Это обследование методом полимезарной цепной реакции, которое включает в себя определение одновременно нескольких видов инфекций: микоплазмы гениталиум, микоплазмы хоминис, гарднереллы вагиналис, кандиды, трихомонады, цитомегаловируса, уреаплазмы уреалитикум, герпеса 1-го и 2-го типов, гонореи, папилломавируса.

Цена такой диагностики колеблется от 2000 до 3500 руб. в зависимости от клиники, используемых материалов и оборудования, а также от вида анализа: качественного или количественного. Какой необходим в вашем случае – решит врач. В одних случаях достаточно лишь просто определить наличие возбудителя, в других, например при ВИЧ-инфекции, важную роль играет количественный титр. При диагностике всех вышеперечисленных возбудителей обследование называют «анализ ПЦР-12».

Результаты анализов ПЦР

Расшифровка анализа ПЦР не представляет сложности. Есть лишь 2 шкалы показателя — «положительный результат» и «отрицательный результат». При обнаружении возбудителя врачи могут с 99%-й уверенностью подтвердить наличие заболевания и приступить к лечению пациента. При количественном методе определения инфекции в соответствующей графе будет указан числовой показатель обнаруженных бактерий. Только врач может определить степень заболевания и назначить необходимое лечение.

В некоторых случаях, например при определении ВИЧ-инфекции методом ПЦР, при отрицательном результате возникает необходимость проведения дополнительных обследований для подтверждения полученных показателей.

  • Положительный. Указывает на то, что в организме пациента присутствует чужеродные ДНК/РНК, а значит произошло заражение. Если у пациента нету каких-либо жалоб, в целом он чувствует себя хорошо, а результаты ПЦР-диагностики положительные, это свидетельствует о начальной стадии заболевания. При подобных ситуациях лечение не отнимет много времени и денег. В крайне редких случаях результат может быть ложноположительным: при нарушении правил антисептики в ходе забора биоматериала.
  • Отрицательный. Означает отсутствие искомых вирусных агентов во взятом образце. Ложноотрицательный результат может стать следствием человеческого фактора (в первую очередь – нарушение правил хранения биообразца, неправильный его сбор).

Количественная оценка исследуемого биоматериала дает возможность делать выводы о том, какой уровень нагрузки оказывают вирусы/бактерии на организм.

В ходе расшифровки определяют число чужеродных РНК или ДНК, которые концентрируются в 1 мл. крови (МЕ/мл).

Благодаря подобной методике, доктор имеет возможность распознать стадию и форму болезни, назначить адекватное лечение, определиться с его продолжительностью.

Повторный анализ зачастую назначают через 1 месяц после лечебных мероприятий.

Из вышенаписанного понятно, что такое ПЦР анализ и видны явные преимущества такого метода исследования. Еще один плюс данной диагностической процедуры – простота расшифровки результатов. Учитывая, сколько делается анализ ПЦР (сам процесс занимает около 5 часов, но лаборатория выдает данные через 1-2 суток), данный метод диагностики становится лучшим вариантом для определения множества инфекций. По результатам врач может сказать вам, что тест:

  1. Отрицательный – в исследуемом материале не было искомого возбудителя.
  2. Положительный – были найдены РНК, ДНК возбудителя.

Иногда проводится количественное определение микроорганизмов. Это необходимо при заболеваниях, которые вызывают условно-патогенные возбудители. Особенность этих вирусов в том, что проявляются они только при избыточном количестве и найти их обычными исследованиями крайне проблематично. Этот фактор важен для выбора терапевтической тактики, чтобы эффективно лечить вирусные инфекции, к примеру, гепатит, ВИЧ.

На 12 инфекций

Чтобы понять до конца, что такое ПЦР диагностика инфекций и насколько она эффективна, нужно узнать, что она способна выделять до 12 возбудителей. Проводится текст только в лабораторных условиях. Для исследования применяют специальные ферменты, которые увеличивают во много раз количество РНК, ДНК фрагментов вируса. Анализ ПЦР на 12 инфекций способен выявить:

  • микобактерии туберкулеза;
  • ВИЧ;
  • цитомегаловирус;
  • гепатит C, G, B, A;
  • герпес 1, 2 типа;
  • вирус Эпштейн-Барра (инфекционный мононуклеоз);
  • инфекции, которые передаются половы путем, к примеру, хламидии;
  • листериоз;
  • ВПЧ;
  • кандидозную инфекцию;
  • хеликобактер пилори;
  • боррелиоз, клещевой энцефалит.

На гепатит С

Этот диагностический метод помогает определить наличие вируса в крови. Это дает врачам возможность говорить о его наличии или отсутствии. Анализ ПЦР на гепатит С бывает двух видов: качественный и количественный. Первый вариант указывает только на его наличие и может иметь формулировку «обнаружен»/«не обнаружен».

Количественный анализ более точный и покажет концентрацию инфекции в крови. Обозначается этот показатель как «вирусная нагрузка», измеряется в количестве вирусной РНК на конкретный объем крови. Расшифровка в разных лабораториях может отличаться. Помимо измерения в МЕ/мл используются единицы измерения «копии».

На туберкулез

Делать тест следует в утреннее время. Это важно для того, чтобы не дать всему массиву мокроты, который образовался за ночь, выйти из желудка. Анализ ПЦР на туберкулез так же важен как ИФА, Манту, томографе. Тест помогает выделить наличие микобактерий, состояние мочи, общий иммуноглобулин, СОЭ, определить состояние легких на данный момент. Для точности получения результатов при анализе ПЦР необходимо проводить его с соблюдением следующих правил:

  1. Осуществляется посев 3 раза, но полную аспирацию содержимого желудка следует проводить только в условиях стационара.
  2. Выявляет микобактерии посев наличествующих масс в желудке менее чем в 50% диагнозов. Даже при получении оптимальных условий рекомендуется вместо них УЗИ.
  3. Даже при отрицательном характере результата не может быть полностью исключена вероятность развития туберкулеза с изменением СОЭ, иммуноглобулина или других показателей.
  4. Посев материалов при ПЦР менее восприимчив на патологические состояния, если получен он в рамках бронхоскопического обследования, который исключает подозрения на ТБ у ребенка.

На ВИЧ

Для многих людей данный диагноз считается смертельным приговором. По этой причине после частых половых связей человек становится более внимателен к сигналам, которые подает его тело (а иногда придумывает их). Самый надежный вариант получить подтверждение или опровержение данного заболевания – ПЦР анализ на ВИЧ. Тест можно использовать для определения следующих возможных проблем со здоровьем:

  1. Опровержение/подтверждение наличия ВИЧ в период серонегативного кона.
  2. Определение генотипа ВИЧ-1, ВИЧ-2.
  3. Уточнение описания патологического процесса при сомнительном результате иммуноблота.
  4. Заражение после переливания крови.
  5. Определения ВИЧ-статуса у детей, которые родились от матерей-носителей заболевания.
  6. Помогает установить наблюдение за вирусной загруженностью организма.

На ВПЧ

Вирус папилломы может быть выявлен у любого человека, долгое время он может находиться в латентном состоянии. Развитие провоцирует ослабление иммунитет, стрессы или эмоциональные всплески. Анализ ПЦР на ВПЧ помогает определить концентрацию вируса в крови. По этой причине рекомендуется проводить количественно определение, а не качественное. Эти данные помогут спрогнозировать вероятность развития злокачественного характера инфекции.

Анализ мочи

Методика диагностики наличия ВПЧ основывается на основном свойстве ПЦР выделять из материала ДНК вируса. Из-за высокой чувствительности теста даже небольшое количество бактерий будет обнаружено. Количественное исследование открывает врачам возможность установить степень опасности заболевания, составить прогноз на будущее.

На герпес

Данный вид диагностики в микробиологии помогает с высокой точностью проводить анализ ПЦР на герпес. Копирование фрагментов ДНК вируса будет происходить только, если в материале присутствует нужный ген. В данном случае тест по результатам проведения может указать на наличие или отсутствие возбудителя. Выявить его удастся даже при низкой концентрации в крови.

Еще один плюс анализа ПЦР в том, что он может определить герпетическую вирусную инфекцию сразу же после заражения, до появления клинической симптоматики. Можно определить тип герпеса (1 или 2), для сдачи анализа специфической подготовки не требуется, но врачи рекомендуют перед забором крови отказаться от:

  • жареного;
  • острого;
  • алкоголя;
  • жирного.

При беременности

При вынашивании ребенка очень важно провести данное исследования, чтобы поставить на учет состояние женщины. ПЦР анализ при беременности входит в перечень самых эффективных методов определения наличия разнообразных заболеваний. Провести тест нужно не только для выявления патологий, но и для определения вероятности заражения ребенка внутриутробно. Только благодаря ПЦР-диагностики стало возможным выявить степень прогрессирования, развитие множества инфекций внутри утробы матери.

Как правило, расшифровка качественной ПЦР не представляет сложности. Но во избежание ошибочной трактовки, с полученным из лаборатории бланком следует обратиться к врачу. Варианты, что означает та или иная разновидность ПЦР, приведены в таблице.

Вид исследования Возможный результат и предполагаемая расшифровка
Качественная ПЦР

Отрицательный: человек здоров либо концентрация вирусной РНК в крови слишком мала для детекции. 

Положительный: человек инфицирован

Количественная

Проводится, если обнаружено РНК вируса качественным методом исследования.

В зависимости от того, какие результаты анализов получены, определяется уровень вирусной нагрузки

Генотипирование

Проводится при гепатите С, подтвержденном другими методами исследования.

Анализ позволяет установить точный генотип возбудителя патологии

Палочка и контейнер для забора кала

Но нередко возникает ситуация, когда ИФА на гепатит С положительный, а ПЦР отрицательный. Расшифровать такие результаты анализов может только врач.

Однако подобные данные возможны в следующих случаях:

  • беременность;
  • перенесенный в острой форме гепатит С;
  • пройденный курс лечения от HCV;
  • наличие инфекций, повышающих вероятность ложноположительного результата ИФА.

Только полимеразная цепная реакция показывает точное наличие вирусной инфекции в организме. На фоне отрицательной ПЦР положительный ИФА в большинстве случаев говорит о том, что человек не инфицирован. Но врачу следует точно установить причину ложноположительного результата.

Качественный анализ

Анализ ПЦР качественный на гепатит С подтверждает присутствие возбудителя заболевания в крови. Если РНК вируса не обнаружена, человек здоров. Но при подозрении на инфицирование рекомендуют повторно пройти исследование. Положительный результат свидетельствует об инфицировании. Но этот анализ не позволяет дифференцировать хронический гепатит С от острого, и не может показать, насколько активен патологический процесс.

Понравилась статья? Поделиться с друзьями:
Информационный сайт
Adblock detector